Патогенетические факторы патозооспермии и нарушения антиоксидантной активности эякулята у молодых мужчин с постпубертатным висцеральным ожирением и неотягощенным андрологическим анамнезом

ОБОСНОВАНИЕ

В наших ранних работах была установлена большая распространенность патозооспермии у мужчин с висцеральным ожирением по сравнению со здоровыми людьми даже с учетом отсутствия пациентов с отягощенным андрологическим анамнезом [1, 2]. Одним из типичных патогенетических факторов патозооспермии при ожирении является гипогонадизм [3]. Однако другие патогенетические факторы патозооспермии и нарушения антиоксидантной активности (АОА – комплекс антиоксидантов спермоплазмы, угнетающий радикалообразование на различных фазах цепной реакции свободнорадикального окисления и защищающий сперматозоиды от повреждений) эякулята у таких пациентов остаются неустановленными.

ЦЕЛЬ

Выявление патогенетических факторов патозооспермии и нарушения АОА эякулята у пациентов с постпубертатным висцеральным ожирением и неотягощенным андрологическим анамнезом.

МЕТОДЫ

Дизайн исследования

Сплошное одномоментное исследование.

Критерии соответствия

В исследование включались совершеннолетние пациенты мужского пола с постпубертатным алиментарным висцеральным (окружность талии (ОТ) от 98 см) ожирением в возрасте до 30 лет включительно. Критериями исключения являлись: индекс массы тела (ИМТ) >35 кг/м², объем любого из яичек менее 15 мл, нарушения кариотипа, задержка полового развития, наличие в анамнезе крипторхизма, варикоцеле, воспалительных заболеваний, опухолей, травм или хирургических вмешательств на половых органах и области головного мозга, включая гипофиз, криптозооспермия, азооспермия, бактериоспермия, лейкоспермия, урогенитальные инфекции, носительство антиспермальных антител, сахарный диабет, гипогонадизм, гипотиреоз, гиперпролактинемия, гиперкортицизм.

Условия проведения

Пациенты, проходившие обследование в отделении андрологии и урологии ФГБУ «НМИЦ эндокринологии» Минздрава России.

Продолжительность исследования

Исследование одномоментное, данные собирались однократно.

Описание медицинского вмешательства

Осуществлялся забор крови в пробирки типа «вакутейнер» в утреннее время натощак из локтевой вены, а также эякулята в стерильные контейнеры путем мастурбации (половое воздержание 3–5 сут).

Основной исход исследования

Основным исходом исследования является получение данных о патогенетических факторах патозооспермии и нарушениях АОА эякулята у молодых мужчин с висцеральным ожирением.

Дополнительные исходы исследования

Дополнительным исходом исследования является установление взаимосвязи выявленных патогенетических факторов с количественными показателями сперматогенеза у молодых мужчин с висцеральным ожирением.

Анализ в подгруппах

Включенные в исследование пациенты были разделены на 2 группы: 1-я группа – мужчины с нормозооспермией и нормальной АОА эякулята, 2-я группа – мужчины с патозооспермией и нарушенной АОА эякулята.

Методы регистрации исходов

У всех пациентов были определены ИМТ и ОТ. Концентрацию биохимических показателей сыворотки крови – холестерина (ХС), холестерина липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), холестерина липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), триглицеридов (ТГ), глюкозы определяли на биохимическом анализаторе HITACHI (Biohringer Mannheim, Япония). Уровни инсулина определяли на автоматическом хемилюминесцентном анализаторе Autodelfia (Wallac, Финляндия). На основании уровней глюкозы и инсулина рассчитывался индекс НОМА. Оценка спермограмм осуществлялась в соответствии с рекомендациями ВОЗ, 2010 г. путем световой микроскопии с помощью микроскопа Olimpus 41 CX (Япония) и камеры Маклера того же производителя [4]. Учитывая, что на параметры спермограммы может влиять множество различных факторов, ее анализировали двукратно (ориентировались на лучший результат). Кроме того, с целью оценки содержания сперматозоидов с интактными головками и отсутствием патологических изменений (норма >4%), сперматозоидов с недостаточно конденсированным хроматином (норма <30%), а также оценки патологических изменений головки, шейки, акросомы и жгутика сперматозоидов проводилось электронно-микроскопическое исследование эякулята (ЭМИС). Эякулят после разжижения фиксировали 2,5% раствором глутарового альдегида на 0,1М какодилатном буфере (рН 7,2–7,4) и 1% р-ром осмиевой кислоты и заливали в эпоксидную смолу. Ультратонкие срезы получали на ультрамикротоме Reichert III и просматривали в электронном микроскопе Hitachi 700 [5–7]. АОА эякулята (норма 1,5–3,2 мМ-экв) определялась с использованием многофункционального потенциометрического анализатора «МПА-1» (НПВП «Ива», г. Екатеринбург) и медиаторной системы, содержащей K₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆] в соотношении 0,01М/0,0001М. Аликвота эякулята 0,2 мл, буферный раствор с медиаторной системой – 1 мл [8].

Этическая экспертиза

Протокол №1 от 01.02.2017 г. заседания ученого совета ФГБУ «Эндокринологический научный центр» Минздрава России.

Статистический анализ

Принципы расчета размера выборки: размер выборки предварительно не рассчитывался.

Методы статистического анализа данных. Статистическая обработка полученных данных была проведена с использованием пакета прикладных программ Statistica (StatSoft Inc. США, версия 8.0). Сравнение двух независимых групп осуществлялось непараметрическим методом с использованием U-критерия Манна–Уитни. Анализ связи (корреляции) двух количественных признаков осуществлялся непараметрическим методом ранговой корреляции по Спирмену. Количественные данные представлены в виде медиан и границ интерквартильного интервала. Статистически значимыми считали различия при p<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Объекты (участники) исследования

В сплошное одномоментное исследование были включены 47 совершеннолетних пациентов мужского пола с постпубертатным алиментарным висцеральным (ОТ >98 см) ожирением в возрасте до 30 лет.

Основные результаты исследования

Показатели качества сперматогенеза и АОА эякулята мужчин ٢-й группы были статистически значимо хуже таковых у мужчин ١-й группы, что было обусловлено межгрупповым делением (табл. 1). При этом для пациентов 2-й группы была характерна статистически значимо большая выраженность ожирения, нежели у пациентов ١-й группы. Кроме того, уровни ЛПНП и ТГ у пациентов ٢-й группы были статистически значимо выше наблюдаемых в ١-й группе, а уровни ЛПВП, напротив, статистически значимо ниже, при отсутствии статистически значимых различий в уровне ХС и индексе НОМА.

Таблица 1. Результаты обследования мужчин

* U-критерий Манна–Уитни; различия статистически значимы при p<0,05.

Дополнительные результаты исследования

При проведении корреляционного анализа не было выявлено статистически значимых корреляций между показателями сперматогенеза и липидного спектра крови, но были выявлены статистически значимые отрицательные корреляция между АОА эякулята и уровнями ЛПНП (n=٤٧; r=-0,310; p=0,033), а также ТГ (n=٤٧; r=-0,366; p=0,011). При этом были выявлены статистически значимая положительная корреляция между АОА эякулята и содержанием в эякуляте нормальных форм сперматозоидов (n=٤٧; r=0,343; p=0,017), а также статистически значимая отрицательная корреляция между АОА эякулята и содержанием в эякуляте сперматозоидов с недостаточно конденсированным хроматином (n=٤٧; r=-0,858; p=<0,001).

Нежелательные явления

Нежелательные явления отсутствовали.

ОБСУЖДЕНИЕ

Резюме основного результата исследования

Нарушения липидного спектра крови могут являться патогенетическим фактором патозооспермии при висцеральном ожирении. Однако действие дислипидемии на сперматогенез может быть опосредовано через снижение АОА эякулята.

Обсуждение основного результата исследования

Повышенный уровень ЛПНП и ТГ у пациентов с патозооспермией может свидетельствовать о роли этих патогенетических факторов в развитии нарушений сперматогенеза при ожирении. Тем не менее нами не было выявлено корреляций между ЛПНП или ТГ и количественными показателями сперматогенеза. Это может объясняться тем, что дислипидемия не действует на сперматогенез напрямую, а оказывает свое негативное воздействие через развитие оксидативного стресса. По данным зарубежных исследований, дислипидемия in vitro сопровождалась развитием оксидативного стресса [9], а в клиническом исследовании приводила к снижению числа нормальных сперматозоидов [10]. В нашем исследовании уровни ЛПНП и ТГ отрицательно коррелировали с АОА эякулята, в то время как АОА эякулята положительно коррелировала с содержанием нормальных сперматозоидов, что подтверждает патогенез действия дислипидемии при патозооспермии через развитие оксидативного стресса. На роль оксидативного стресса в развитии нарушений сперматогенеза указывают и работы других авторов [11–13]. В отношении показателей углеводного обмена нами не было установлено их влияния на сперматогенез. В других работах отмечается негативное влияние гиперинсулинемии и инсулинорезистентности на показатели сперматогенеза и развитие оксидативного стресса [14–16]. Отсутствие этого влияния в нашей работе может объясняться молодым возрастом пациентов и отсутствием у них нарушений углеводного обмена.

Ограничения исследования

Формирование выборки проводилось из пациентов, наблюдавшихся в крупном федеральном медицинском центре, следовательно, данные о состоянии сперматогенеза в общей популяции мужчин могут отличаться от полученных в исследовании.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

У молодых мужчин с постпубертатным висцеральным ожирением и неотягощенным андрологическим анамнезом нарушения липидного спектра крови могут являться патогенетическими факторами патозооспермии. Однако действие дислипидемии на сперматогенез может быть опосредовано через снижение АОА эякулята вследствие развития оксидативного стресса.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Источник финансирования. Исследование выполнено в рамках государственного задания – «Сигнальные молекулы адипоцитов: геномные и постгеномные механизмы реализации физиологической и патогенетической функций жировой ткани при эндокринопатиях» Номер государственного учета НИОКТР АААА-А17-117012610112.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Информация о вкладе каждого автора. Роживанов Р.В. – разработка концепции исследования, сбор научного материала, статистическая обработка данных, написание текста; Бобков Д.Н. – сбор научного материала, написание текста; Курбатов Д.Г. – разработка концепции исследования, редактирование текста.